利用真菌绿色合成纳米银及其抗菌活性Talaromyces purpureogenus隔绝水松baccata林恩。

目前的研究重点是利用内生真菌合成纳米银(AgNPs)Talaromyces purpureogenus,隔绝水松baccata林恩。细胞外的提取Talaromyces purpureogenus已显示出次生代谢物的发生，即萜类和酚类。气相色谱-质谱分析显示16种化合物的存在。采用紫外可见光谱、傅里叶变换红外光谱、动态光散射、场发射枪扫描电子显微镜、高分辨率透射电子显微镜、能量色散x射线能谱和x射线衍射等技术对合成的AgNPs进行表征。紫外-可见光谱显示在380-470 nm处有尖峰，表明银的存在。红外光谱分析表明，该化合物中含有酚、羟基和伯胺等多种官能团。在DLS中，合成的AgNPs的z -平均尺寸和PdI分别为240.2 r.nm和0.720,zeta电位为−19.6 mV。在FEG-SEM和HRTEM中，球形AgNPs的直径在30 ~ 60 nm之间。在EDS分析中，Ag的重量率为67.26%，原子率为43.13%。XRD分析发现，真菌合成的AgNPs尺寸为49.3 nm，面心立方晶。这些纳米颗粒对被测菌株显示出显著的抗菌活性。单核细胞增多性李斯特氏菌(13±0.29 mm)，大肠杆菌(17±0.14 mm)，痢疾(18±0.21 mm)和伤寒沙门氏菌(14±0.13 mm)。这些合成的AgNPs对2,2 ' -二苯基-1-三硝基肼基表现出有效的自由基清除活性。本研究表明，内生真菌Talaromyces purpureogenus可以作为合成AgNPs的主要来源，通过使用生物的，生态友好的，无毒的方式，并伴有抗菌和抗氧化性能，进一步减少收获压力的水松baccata。

图形抽象

裸子植物主要因其木材品质、树脂、胶质和药用价值而被开发[1］．水松baccata林恩。在喜马拉雅山脉的西部和东部海拔2300-2800米的地方发现的一种裸子植物，有无数的药用价值，如用于肾脏疾病，阿尔茨海默症[2，支气管炎，哮喘，和作为壮阳药[3.］．除了这些用途外，树皮还被当地社区用作腌茶[4树皮糊用来治疗头痛，也用作膏药来修复骨折。5］．这种植物被认为是抗癌药物紫杉醇或紫杉醇的良好来源[6，7］．然而，这种植物的实用价值正导致它在几个方面的退化。缺乏良好的收割技术和法定程序，树叶和树皮被无情地收割，导致对植物的不明智的开发。此外，商业用途对这种植物资源的过度压力和生境的干扰，正导致其迅速消失[8，9，10］．水松baccata是多种微生物的绝佳宿主，例如内生细菌(洋葱而且肠杆菌属) [11]、内生真菌(曲霉属真菌，镰刀菌素，青霉菌，木霉属等。12，13]和菌根[12，14］．内生真菌存在于植物的内部组织中，不会对它们造成任何明显的伤害。据报道，这些真菌可以合成多种被称为次生代谢物的化合物，这些化合物具有抗菌、抗真菌、抗癌、抗氧化和其他各种重要活性[15，16，17］．

组织提取物水松baccata是许多药物的来源。更进一步的是，纳米级粒子被涂上组织提取物水松baccata工作比普通工艺更精确[18，19］．然而，这种对植物的依赖可以通过使用真菌来生产封装在纳米颗粒上的抗癌材料来最小化。20.，21，22］．纳米生物技术已成为一种有前景的技术，以开发新的治疗活性纳米材料;纳米颗粒就是其中之一[23］．纳米颗粒具有特殊的光学、电子和磁性[24］．纳米颗粒的尺寸非常小，因此对靶位点有很强的粘附性，在系统中不容易被冲走，因此增加了它们在靶细胞(如癌细胞)上的停留时间。这种滞留时间的增加可以更好地给药和治疗问题[25］．

次级代谢物的暴露使金属离子减少为纳米金属颗粒[26］．在其他金属纳米颗粒中，银纳米颗粒因其生物相容性而得到了广泛的研究[27］．银纳米颗粒具有多种有益的性质，包括光学、良好的导电性和生物特性。纳米银在抗菌剂、传感器、食品工业和抗癌等方面的应用日益广泛。生物合成的纳米银具有高溶解度、稳定性、高产率和抗菌性能。AgNPs的合成过程也是无毒且具有成本效益的[28，29，30.，31］．许多真菌包覆金属纳米粒子的合成已被报道[32，33，34，35，36］．一种非常重要的真菌青霉菌从一种有用的植物中分离出来的Glycosmis mauritiana，已报道有效产生AgNPs，显示出良好的抗氧化、抗菌、抗炎和酪氨酸酶抑制活性[37］．真菌Talaromyces pupureogenus隔绝松果体sp.可形成平均大小为25 nm的AgNPs，并显示出较强的抗菌和抗氧化性能[22］．水松baccata也被认为是许多真菌种类的宿主[12，38］．从真菌中分离得到大小为5 ~ 70nm的球形AgNPsNemaniasp.隔绝水松baccata．这些AgNPs对某些有害细菌显示出显著的抗菌活性[38］．所以，在目前的真菌研究中，Talaromyces purpureogenus从裸子植物中分离出来的水松baccata已经被用于AgNPs的合成，这些纳米粒子的表征已经用各种分光光度技术完成。此外，这些AgNPs的活性已被测试为抗菌和抗氧化剂。

内生真菌的分离与鉴定

植物的健康组织(叶、茎和根)水松baccata采集自印度喜马偕尔邦西姆拉区的Choordhar地区。用Schulz等人的方法在实验室对组织进行消毒。[39］．植物组织在流动的自来水下被适当地清洗。首先在70%乙醇中浸泡60 s，然后次氯酸钠(4%有效氯)浸泡3 min，然后在75%乙醇中浸泡30 s。对于树叶的灭菌，Suryanarayan和Thennarasan的方法[40)之后。叶子样本被切成不同大小的碎片。最后，将灭菌后的样品用蒸压蒸馏水冲洗三次，在层流中晾干。植物样本如根、皮、茎和叶被切成小块，放在含有马铃薯葡萄糖琼脂的培养皿上(PDA, Himedia pt . Ltd.)。印度)。PDA还提供链霉素(100 mg/L, Himedia ppt . Ltd.)。印度)，以防止内生细菌生长。培养皿在28±2℃孵育。这些培养皿定期观察内生真菌的生长。在新鲜的PDA平板上连续转移菌丝尖，获得了内生真菌的纯培养。 Morphological identification of the isolated endophytic fungi was performed at ARI Pune, India (Agharkar Research Institute). Out of 08 endophytic fungi 07 (黄曲霉，答:nidulans，答:尼日尔，青霉菌viridicatum等)属于曲霉菌科;Talaromyces purpureogenusTrichomaceae)。利用ITS4和ITS5引物对PCR对分离出的真菌进行分子水平鉴定。鉴定工作是在印度浦那ARI (Agharkar研究所)进行的。t . purpureogenus形成柔软和棉质的子囊鱼，菌丝交织。这种真菌的子实体呈淡黄色。对分生孢子、元胞和珠胞等结构进行了仔细观察。瓶体由金属片支撑。此外，当基因组DNA以纯形式从培养物中分离出来时，对真菌进行了鉴定。ITS-rDNA部分基因用ITS4和ITS4成功扩增。用ABI-BigDye进行PCR测序^®Terminatorv 3.1周期测序试剂盒。从ABI 3100自动DNA测序仪获得的原始序列被手动编辑以避免不一致。序列数据与公开的序列进行比对，并分析以获得身份。对分离得到的内生真菌进行抑菌活性和抑菌活性的筛选t . purpureogenus对被测菌株有显著活性。因此，我们进一步选择它来合成AgNPs。

内生真菌提取物的制备

t . purpureogenus接种于马铃薯葡萄糖肉汤(PDB)中，在28±2℃的培养摇床上以150 rpm的转速培养6天。定期观察真菌的生长情况。利用Whatman号滤纸对真菌生物量进行过滤。1.用蒸馏水冲洗3次以除去介质。内生真菌提取物的制备，两种标准程序[41，42]。称量收获的真菌质量，其中20克转移到500毫升的Erlenmeyer烧瓶中，其中含有100毫升蒸馏水。这些烧瓶在28±2°C下孵育24小时，以180转/分的转速进行提取。实验结束后，用Whatman 1号滤纸对无细胞滤液进行过滤，并用于进一步的实验过程。

筛选次级代谢物

对于次级代谢物的筛选，采用Radji等的方法[43之后进行了轻微的修改。从含有真菌菌丝体的琼脂板上切下小矩形块，接种到250毫升的Erlenmeyer烧瓶中，瓶中含有100毫升(PDB)。倒入烧瓶后，在25-27°C下孵育21天，偶尔摇动。设定时间后，滤液过滤，分离菌丝和滤液。以05有机溶剂为主，标准化后优选乙酸乙酯作为提取溶剂，其效果优于其他有机溶剂。由于乙酸乙酯的极性比醇提取物低，它比醇提取物更能溶解富烃次生代谢物。对以前工作的洞察也证实了溶剂的选择[44，45］．在滤液中加入等量的乙酸乙酯。混合10 - 15min后静置5-10 min，观察到形成两层清晰的不混溶层。乙酸乙酯的上层是用分离漏斗分离的，因为它含有提取的化合物。旋转蒸发加上35-40°C的减压来去除溶剂，得到浓缩的提取物。此外，提取液在DMSO中溶解并储存在冰箱中。真菌提取物中植物化学物质的定性筛选遵循Devi等人的标准程序．［46］．

真菌提取物的GCMS分析

用气相色谱-质谱(GCMS分析仪- thermo Scientific TSQ 8000气相色谱-质谱分析仪)对化合物进行质谱分析。它与GC TRACE-1300 GC配对。离子源为EI源，可编程温度350°C，质量范围2.1100 a.m.u，柱温400°C。色谱柱为Rtx-5，柱长30 m，柱内径0.25 mm，膜包覆0.25 μ m。样品经Whatman过滤装置(0.2 μ m)过滤。裂解模式下，以99.99%的氦气为载体，流速为1 mL/min。取1µL的真菌提取物注入入口温度为280°C的柱中。烤箱的温度最初设置在70°C，持续2分钟，然后以7°C/min的速度上升到320°C。离子源温度保持在250℃。在70 eV的电子电离下，在30-500 Da原子单位的扫描模式下，获得了真菌提取物中化合物的质谱。 The total running time was 22.77 min with 6694 scans. The obtained spectrum of the extract was compared with the database of the National Institute of Science and Technology (NIST) library [47］．

AgNPs的生物合成与表征

用于AgNPs的合成Talaromyces purpureogenus， Sandhu等人的方法[48的选择几乎没有什么改动。硝酸银水溶液(80 mL;2 mM)与20 mL真菌提取物混合，室温孵育。烧瓶被铝箔覆盖，以减少光氧化的机会。在进行最终的纳米粒子合成过程之前，先对反应混合物进行标准化。根据标准确定了与颜色变化和AgNPs合成相对应的时间限制。12 h、24 h、36 h、48 h、72 h、96 h后提取样品等分，观察颜色由透明变为深棕色。

为了确定AgNPs的成功合成，紫外可见分光光度法(岛津紫外可见分光光度计)是通过在300-700 nm的不同时间间隔(1,12,24,48,72和96 h)测量溶液的吸光度。反应48-72小时后，混合物以12000转/分离心15分钟。用双蒸馏水重复洗涤(4次)去除无粘结的盖层物质。然后，将颗粒进行冻干，得到材料的干粉。FTIR检测到合成的纳米颗粒中有不同类型的官能团参与稳定和覆盖。特征峰记录在400-4000 cm⁻¹分辨率4厘米⁻¹．样品分析了两次。利用动态光散射分析(DLS-Malvern)对尺寸进行分析。表面形貌研究采用FEGSEM技术。然而，在元素分析中，使用了FEGSEM-EDS。为了分析合成纳米粒子的形状和大小，将AgNPs粉末悬浮在乙醇中进行高分辨率透射电子显微镜(HRTEM)，并在HRTEM- edx(能量色散x射线能谱)的帮助下发现了特定金属基团的存在。最后，利用XRD分析了AgNPs在布拉格角2θ范围内的形貌和结晶性质，扫描速率为30 ~ 80，扫描速率为0.041/min，时间常数为2 s。

抗菌活性

为了测定AgNPs的抗菌活性，采用了Brumfitt等人描述的圆盘扩散法．［49］．根据文献，该方法优于其他方法，具有良好的前景和准确的结果[22］．所有的细菌菌株(单核细胞增多性李斯特氏菌，痢疾，大肠杆菌,伤寒沙门氏菌)在50 mL Erlenmeyer烧瓶中放入10 mL MHB, 37℃培养24 h。将50 μ L的细菌细胞悬液分散在MHA板上。此外，用Whatman滤纸(3)进一步蒸压和灭菌制备直径6毫米的圆盘。将这些圆盘浸入不同浓度的AgNPs溶液中。阳性对照给予抗生素(Vanomycin和Ampicillin, 0.1 mg/mL)。含有抗生素的培养皿作为阳性对照，含有DMSO的培养皿作为阴性对照。将这些纸圆盘放在每个板上，然后在37°C下孵育24小时。用游标卡尺测量AgNPs的抑菌活性为一个清晰的抑制区(mm)。

抑菌剂抑制/防止细菌生长的最低浓度称为最低抑菌浓度(MIC)。Sarkar等人的微肉汤稀释法测定合成AgNPs的MIC值[50)之后。在微滴定板的每孔中加入各无菌营养液和生理盐水50µL。50 μ L的纳米颗粒溶液溶于DMSO (25 mg/mL)中。将这50 μ L添加到微滴定板的第一排，然后在平板上进行连续稀释。每孔添加10µl的再青嘌呤染料(指示剂)和细菌接种剂。为了防止细菌脱水，将培养皿适当地包裹在保鲜膜中，并在37°C下孵育24小时。这些实验都是重复进行的，以避免任何类型的错误。观察到井中溶液颜色的变化。如果颜色从紫色变为粉色或无色，就表明里面有细菌生长。观察到无颜色变化的最低浓度作为AgNPs的MIC值。

抗氧化试验

用于测定抗氧化电位t . purpureogenus并合成了AgNP的两种测定方法，即DPPH测定和还原力测定。

DPPH(1,1 -二苯基-2-苦酰基肼基)自由基清除活性

合成的纳米银的抗氧化活性是通过DPPH(1,1-二苯基-2-苦丙基-肼基)自由基清除试验测定的，Blois [51］．用不同浓度(30µg/mL、60µg/mL、90µg/mL、120µg/mL、150µg/mL)的10% DMSO制备的提取液1 mL，与DPPH + DMSO组成的标准品一起制备。在黑暗条件下加入1 mL 0.3 mM DPPH，在黑暗中孵育30分钟。用紫外-可见分光光度计(UV-1800 Shimadzu)在517 nm处测定吸光度。以抗坏血酸作为对照品或标准品，浓度相同(30µg/mL, 60µg/mL, 90µg/mL, 120µg/mL, 150µg/mL)。抑制率由下式计算:

去除DPPH 50%自由基的提取物称为其IC₅₀价值。集成电路₅₀值(µg/mL)通过绘制不同浓度提取物的抑制率图来确定。

还原能力测定

在估算真菌提取物和AgNPs的还原电位时，采用Oyaizu [52)之后。以抗坏血酸为标准。将1 mL蒸馏水与真菌提取物/AgNPs和标准物(1 mg/mL)混合。将该溶液与磷酸盐缓冲液(2.5 mL, 0.2 mol/L, pH 6.6)和铁氰化钾(2.5 mL, 1% w/v)进一步混合。将溶液混合均匀，以3000转/分钟的转速离心10分钟。然后，将2.5 mL上清液与2.5 mL蒸馏水和0.5 mL FeCl混合_3.0.1% (w / v)。在700 nm处用紫外-可见分光光度计(UV-1800 Shimadzu)测量吸光度。实验重复3次。反应混合物的吸光度较高，说明真菌提取物和AgNPs具有较强的还原能力。

利用ITS4和ITS4测序对真菌菌株进行分子鉴定。被测菌株的序列相似性为100%Talaromyces purpureogenus．序列分析与NCBI登录号MK108916.1，Talaromyces purpureogenus应变KNUPD2导致以下对齐统计信息。查询长度- 531，得分- 958位(1062)，期望- 0.0，标识- 531/531 (100%)，gap - 0/531 (0%)， Strand-Plus /Plus。BLASTn和NCBI通过同源搜索的方法进行序列鉴定，寻找与真菌种类密切相关的序列。这种真菌具有分泌多种次生代谢物的能力。次生代谢物，即萜类和酚类已在Talaromyces purpureogenus然而，肉汤提取液和菌丝提取液中都没有单宁和生物碱。这些酚可能在材料的抗氧化性能中起着至关重要的作用。gc - ms分析,t . purpureogenus与NIST数据库进行比较，发现有16种化合物存在。鉴定出的主要化合物为邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸、庚-3-丁酯(57.90%)、9,12 -十八碳二烯酸、甲酯(29.60%)、2氨基-4-羟基6-甲基嘧啶(4.17%)和Apiol(2.31%)。

反应混合物，即菌丝提取物和AgNO的颜色_3.每隔一定时间观察一次，48 h后由白色变为橙褐色(图1)。1b, c).这种颜色变化可能与生物产生的AgNPs内部激发表面等离子体激振的过程有关[53］．在紫外可见光谱中，紫外可见光谱在390-460 nm处得到一个峰。2)．

在光谱分析过程中，按照标准化过程中规定的时间间隔进行光谱分析。在450 nm处观察到最大吸光度，这是真菌合成AgNPs的一个表面等离子体共振峰[54]，结果与先前的研究结果相似[55，56］．在438 nm波长处获得的峰可能使纳米颗粒的尺寸范围为60-80 nm [57］．这些结果与先前的结果一致[19，58，59，60，61］．红外光谱(无花果。3.)显示在3428.4 cm处有条带⁻¹证实了羟基的存在，氢键- oh拉伸[62］．峰:高1621.9厘米的峰⁻¹显示酰胺或伯胺存在N-H弯曲。峰:1383.9厘米高的峰⁻¹证实了酚或叔醇的存在-哦弯在1076.1厘米处有一个峰⁻¹对应于-C-N伯胺拉伸或大环环醚，C-O拉伸。峰高1022.0厘米⁻¹对应芳香C-H平面内弯。最高峰在516.0厘米处⁻¹可能对应于芳基二硫化物(S-S)或聚硫化物(S-S延伸)或C-Br延伸的存在[63］．这就得出结论，这些官能团以某种方式参与了AgNPs的稳定，并起到了封盖剂的作用[64］．这些结果与先前的结果一致[38，65］．

采用动态光散射(DLS)测量zeta电位，计算出AgNPs的平均尺寸(图1)。4)．z均值为240.2 r.nm, PdI值为0.720。4a). Zeta电位具有高负值或高正值，表现出相互排斥的趋势，从而降低团聚[65，66］．纳米颗粒的多分散性质是高度负zeta电位避免形成团聚体，从而获得简洁的稳定性的结果。得到的纳米粒子zeta电位为−19.5 mV(图5)。4B)证明银纳米颗粒的排斥性导致稳定性[67，68］．目前的x射线衍射分析表明，合成的AgNPs的性质是结晶(图。5)．合成的AgNPs的XRD谱图如图所示。5．XRD分析结果表明，38°、46°、67°和78°的2θ值分别对应于银的平面111、200、220和311。XRD结果证实了AgNPs的存在。这些结果也证实了AgNPs的晶体面心立方的性质，这与JCPDS数据库(现称为ICDD)文件号一致。04 - 0783。这些结果与以往生物合成AgNPs的XRD结果一致[17，49，56，60，69，70］．

用FEG-SEM观察真菌合成的AgNPs的形态特征(图1)。6a)显示了AgNPs的各种形状和大小，很少有团块形成。在FEG-SEM中，AgNPs显示出花椰菜样的形态(图1)。6A)，与前面的结果一致[50］．HRTEM(无花果。6b)结果显示合成的AgNP为圆形到椭圆形/圆形[71]，直径由30至60纳米不等。EDX分析证实银原子的含量为0.63%。HRTEM-EDS(无花果。7)分析结果表明，银的重量占67.26%，原子的含量占43.13%。通过在3.0 keV的EDS特异性峰证实了真菌合成的AgNPs的存在。

EDS显微图中也出现了碳、氧和铜的峰。7)．一般情况下，样品被涂覆在铜栅上，其残余可能导致峰值显示在8 keV。这些结果与先前的结果一致[55，58］．通过紫外可见光谱、DLS分析和FTIR分析三个参数对合成的纳米银的稳定性进行了50-60天的观察。这里，紫外可见光谱显示吸收峰在440-480 nm范围内。此外，AgNPs的z -平均尺寸为304.7 r.nm, PdI为0.807(图5)。4c).观察到zeta电位为−16.6 mV，仍然是一个良好的结果(图5)。4d)在3317.0、1041.0和1589.0 cm处的具体峰⁻¹与前面讨论的观点非常相似(图。3.)．纳米颗粒的这种稳定性在抑菌潜力方面起着至关重要的作用。

在本研究中，这些真菌合成的AgNPs显示出显著的抗菌活性(图。8)对照一系列的细菌，即．大肠杆菌、志贺氏杆菌sp．，伤寒沙门氏菌(革兰氏阴性)李斯特菌Sp .(革兰氏阳性)与阳性对照vanomycin和ampicillin相似。最高的抑制区被发现是在大肠杆菌(17.00±0.14 mm)次之志贺氏杆菌Sp(18.00±0.21 mm)伤寒沙门氏菌(14.00±0.13 mm)。最低的抑制区被发现在李斯特菌sp.(13.00±0.29 mm1)．这些结果与以往的报告一致[72，73，74］．采用MIC法检测对上述4株细菌的抑菌活性。不同菌株真菌提取物的MIC为31.25µg/mL (李斯特菌而且志贺氏杆菌)， 125 μ g/mL (大肠杆菌)和62.5 μ g/mL (伤寒杆菌)．真菌合成银纳米颗粒对不同菌株的MIC为1.5625µg/mL (李斯特菌而且志贺氏杆菌), 0.78125 (大肠杆菌)及3.125 (伤寒杆菌)．

DPPH(图分析。9a)评估真菌提取物和真菌合成的AgNPs的抗氧化性能。真菌提取物在低浓度和高浓度下的抑菌率分别为10.554%和23.571%;同样，真菌合成的AgNPs在低浓度时抑制率为15.215%，在高浓度时抑制率为32.894%。的集成电路₅₀真菌提取物和AgNPs分别为393.6361和250.3009 μ g/mL。用铁含量的变化来测定还原电位^{3 +}对菲^{2 +}．与真菌提取物相比，AgNPs的吸光度值更高。9B)表明它们具有巨大的还原潜力和提供电子以稳定自由基的能力。从结果来看，可以假设真菌合成的AgNPs作为抗氧化剂的性能优于真菌提取物。这一有效的结果可以认为它们是一个很好的天然抗氧化剂的来源，可以平衡抗氧化和ROS水平，从而防止细胞损伤和细胞内容物的退化。

以生物方式合成金属纳米颗粒已被证明是一种有效的方法，该过程的毒性较小。在本研究中，一种内生真菌，Talaromyces purpureogenus是独立于水松baccata林恩。该真菌显示了其降低AgNO的能力_3.到AgNPs，在那里它产生了高质量的结晶AgNPs，并使用各种技术进行表征，如紫外可见光谱，FTIR, FEG-SEM, HRTEM和XRD。FTIR分析中发现的官能团可能具有封盖剂的作用。该颗粒粒径约为49.3 nm，具有结晶fcc性质。AgNPs对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有作用。由此得出结论，分离出的真菌Talaromyces purpureogenus不同形状的银纳米颗粒的杰出生产者是否具有有效的抗菌和抗氧化活性，从而进一步实现生物医学和工业用途的通道减压的方法水松baccata由于其巨大的实用价值，正面临着由于不道德的采收技术而采用的问题。

°C:

度摄氏

µL:

微升

µm:

微米

a.m.u:

原子质量单位

Ag:

银

AgNPs:

AgNPs

cm:

厘米

大卫·爱登堡:

道尔顿

DLS:

动态光散射

DMSO溶液:

二甲亚砜

DPPH:

2, 2’-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EDS:

能量色散x射线衍射

FCC:

面心立方

FEG-SEM:

场发射枪扫描电子显微镜

红外光谱:

傅里叶变换红外光谱

旅客:

克

气相:

气相色谱-质谱

h:

小时/小时

盐酸:

盐酸

介绍:

高分辨率透射电子显微镜

ICDD:

国际衍射数据中心

其:

内部转录间隔器

JCPDS:

功率衍射标准联合委员会

李:

升

林恩。：

林奈

MEEF:

内生真菌的菌丝提取物

mg:

毫克

mg / L:

毫克/升

麦克风:

最低抑制浓度

分钟:

一分钟

mL:

毫升

mm:

毫米

mM:

毫克分子

mV:

毫伏

纳米:

纳米

聚合酶链反应:

聚合酶链反应

PDA:

马铃薯葡萄糖琼脂

PDB:

马铃薯葡萄糖肉汤

PdI:

多分散性指数

r.nm:

半径在纳米

转:

每分钟旋转

证券交易委员会:

第二个

紫外可见:

紫外可见光谱

XRD:

x射线衍射

我们要感谢希姆拉大学生物科学系对实验室的协助。我们要特别感谢CSIR-CSIO Chandigarh、PU-SAIF和PU-CIL设施对不同类型的描述。我们特别要感谢S.K Singh博士，他是普纳国家设施(NFCCI和FIS) ARI的科学家;用于真菌种类的分子鉴定。没有收到任何资金、赠款或其他支助。

这项研究工作没有获得任何资助。

作者和联系

1. 喜马偕尔邦大学生物科学系，希姆拉夏山，171005，喜马偕尔邦

   Ankush Sharma, Anand Sagar & Jagriti Rana

2. 印度哈里亚纳邦罗塔克，124001,Maharishi Dayanand大学遗传学系

   丽娜王妃

贡献

所有的作者都阅读并认可了最终的手稿。

相应的作者

对应到Ankush沙玛．

相互竞争的利益

作者声明他们没有竞争利益。

出版商的注意

施普林格自然对出版的地图和机构附属的管辖权要求保持中立。

开放获取本文遵循创作共用署名4.0国际许可协议(Creative Commons Attribution 4.0 International License)，该协议允许在任何媒体或格式中使用、分享、改编、分发和复制，只要您给予原作者和来源适当的署名，提供创作共用许可协议的链接，并说明是否有更改。本文中的图片或其他第三方材料包含在文章的创作共用许可中，除非在材料的信用额度中另有说明。如果材料不包含在文章的创作共用许可中，并且您的预期用途不被法律法规允许或超出了允许的用途，您将需要直接从版权所有者那里获得许可。欲查看此许可证的副本，请访问http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/．

再版和权限